蛋白質單點質譜分析分子量測定

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上海容大檢測認證

宋詩文/Pines.song
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檢測服務：
1)二維電影2DE電泳: 雙向凝膠電泳是將不同種類的蛋白質按照等電點和分子量差異進行高分辨率分離的分析方法。成功的二維電泳可以將2000到3000種蛋白質進行分離，是目前唯一的同時能分離成百上千種蛋白質的工具。通過對蛋白質雙向電泳的圖譜掃描，用相關軟件（PDQUEST等）進行圖譜差異分析，找到差別點。然后把差別點切出，進行脫色、酶解。最后樣品進入質譜測試，得到質譜原始數據文件。通過搜庫可得到差別點蛋白質的詳細信息。
儀器: Biorad, pharmacia 電泳儀
2)蛋白質鑒定
a)蛋白質單點質譜鑒定：考染/銀染
儀器： ABI 5800 MALDI TOF/TOF
b)大規模混合蛋白質鑒定：針對液體或SDS-PAGE條帶的復雜混合物用酶（Trypsin）酶解成肽段混合物，這些肽段混合物再通過液相色譜分離(如2DLC(陽離子柱SCX和C18反相柱串聯)或1DLC 的C18反相柱)，再用串聯質譜測試，然后在相應的數據庫檢索進行鑒定，可同時鑒定成百上千種蛋白質。
儀器：LTQ orbitrap, Thermo; Waters Nano Aquity UPLC
3）蛋白質后修飾分析
很多mRNA表達產生的蛋白質要經歷翻譯后修飾如磷酸化、糖基化、乙酰化等。翻譯后修飾是蛋白質調節功能的重要方式，而在生命現象的許多關鍵調節機制中，蛋白質的翻譯后修飾與信號傳導，細胞凋亡，細胞周期，生長發育以及癌癥機理等諸多生物學問題有密切關系。因此，對于蛋白質后修飾的研究對闡明蛋白質的功能具有重要意義。
儀器: LTQ orbitrap, Thermo; Waters Nano Aquity UPLC
4）蛋白質分子量測定
a) 蛋白質：樣品蛋白質分子離子化后，通過質量分析器對離子質荷比(M/Z)進行分析，或進一步通過演算法（如高斯算法）得到蛋白質的精確分子量。
b)化合物：利用質譜或HPLC對化合物樣品分子量作分析。
5）蛋白質，化合物純度測定
HPLC，樣品通過HPLC，根據HPLC峰測定樣品純度。
儀器：Agilent 1200
6) 蛋白質全序列測定
蛋白質全序列分析是分析各個肽段而拼湊出原來的蛋白質序列。由于在液相色譜—質譜的分析中很難得到百分之百的回收率，有些分子量較小的氨基酸很容易流失而無法得到其序列，因此目前的方法是使用不同的酶對標定蛋白質酶解，再透過二級質譜的方法來鑒定肽段的序列。科致的蛋白質組學專家經驗豐富，對已知或未知的蛋白質序列，均有能力為客戶完成所需分析。
儀器：LTQ orbitrap, Thermo; Waters Nano Aquity UPLC，MALDI 5800 TOF/TOF.
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